快速实现分析方法转换——我有十八般“兵器”任你挑选

更新日期:2018-08-24
安捷伦科技化学分析

表面多孔颗粒填料液相色谱柱是液相色谱中的一种常用工具。与相应的全多孔颗粒色谱柱相比,表面多孔颗粒色谱柱能够在更低的压力下获得高效率。由于在表面多孔填料中传质距离的缩短而产生较低的涡流扩散,从而保持较低的塔板高度。另外从填料制作工艺上来说,可更大程度上控制填料的粒径分布。更高效的分析可通过使用更小粒径的表面多孔颗粒填料去替换传统全多孔颗粒填料,由于表面多孔填料提供更高的柱效和分离度,从而允许缩小色谱柱体积,从而缩短分析时间。Agilent InfinityLab Poroshell 120 色谱柱正是基于此可以帮助您更快速地完成实验。如今 Poroshell 120 固定相已扩展至 18 种,为分析提供了更全面的选择。

如果您使用的是 Agilent Zorbax,那么 Poroshell 120 色谱柱可以帮助您更快地完成实验。事实上,在安捷伦液相色谱柱系列产品中,已完成了大量有助于轻松实现方法可转换性和可扩展性的工作。全多孔颗粒 Agilent ZORBAX 和表面多孔颗粒 Agilent InfinityLab Poroshell 120 色谱柱的固定相化学性质相似,因此无需进一步的方法开发即可轻松更新方法。

那么如何实操进行方法转换?我们为您提供了方法和应用实例。让您玩转安捷伦Poroshell 120 的十八般“兵器”。

如何进行方法转换?

先说方法论


注意!方法转换时需要遵循以下规则:

1.      色谱柱内径的平方和流速成正比关系

2.      进样量和色谱柱体积成正比关系

3.      运行时间和色谱柱柱长成正比关系

4.      梯度时间和色谱柱柱长成正比关系

氨曲南在中国药典中的方法

转换实例

我们举一个中国药典中方法转换的实例。我们挑选了两根色谱柱,Zorbax Eclipse plus C18 4.6*250mm, 5μm 和 Poroshell 120 EC-C18 4.6*100mm 2.7μm 去重现氨曲南在中国药典中的方法。


方法转换实例:氨曲南 ( Aztreonam )

图为转换氨曲南实验条件

由于方法中使用到了梯度,按照方法转换的规则,梯度时间和色谱柱柱长成正比关系。具体来说对于 250mm 长的 Zorbax Eclipse plus C18 中使用的梯度时间 0-30-35-36-45min,在转换到 100mm 长的 Poroshell 120 EC-C18 时,梯度时间变更为 0-12-14-14.4-18min,也意味着在 250mm Zorbax 色谱柱上原本需要 45 分钟才能走完一针,如今在 100mm 的 Poroshell 色谱柱上,仅需要 18 分钟即可完成一针的分析。


在进样体积方面按照方法转换的规则,进样量和柱体积成正比,因此 250mm Zorbax 色谱柱进样量为 20μl,转换至 100mm Poroshell 色谱柱时,进样量缩小至 8μl。

另外,由于 Poroshell 色谱柱的柱效较高,采样频率使用 10Hz 更加匹配。


氨曲南(Aztreonam)— Poroshell 120 线性转换

图为氨曲南利用 Poroshell 实现线性转换。

从结果上来看,使用 Zorbax Eclipse plus C18 4.6*250mm, 5μm 和 Poroshell 120 EC-C18 4.6*100mm 2.7μm 所得的图谱非常相似,使用 Poroshell 色谱柱甚至能够将原本 Zorbax 色谱柱上未能较好分离的峰实现分离(如蓝色箭头所示)从分析时间上来看,使用 Poroshell 色谱柱可减少 50% 以上的分析时间。

InfinityLab Poroshell 化学键合相与传统 ZORBAX 化学键合相一致 ― 方便您将方法由全多孔色谱柱转移到表面多孔颗粒填料色谱柱。

将 Zorbax 的方法

转换至 Poroshell

InfinityLab Poroshell 化学键合相与传统 ZORBAX 化学键合相一致 ― 方便您将方法由全多孔色谱柱转移到表面多孔颗粒填料色谱柱。

图为 Poroshell 与 ZORBAX 化学键合相对应一览。

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